降鈣素原（PCT）的檢測方法

免疫熒光法

免疫熒光法是一種定量的免疫學(xué)檢測方法。根據(jù)高特異性抗原和抗體的反應(yīng)，預(yù)先在聚酯膜上包被的有金標(biāo)記降鈣素原（PCT）的單克隆抗體和樣本中的降鈣素原結(jié)合，在毛細(xì)的效應(yīng)下，結(jié)合物向上層析，用免疫定量的分析儀對檢測區(qū)進(jìn)行掃描，取得相應(yīng)發(fā)光信號。熒光信號的強(qiáng)度與標(biāo)本PCT濃度成正比，同時(shí)測定已知PCT濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而定量得到標(biāo)本的PCT濃度。這種方法操作方便、線性范圍寬、精密度高、重復(fù)性較好，被廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室。但也有一定的局限性，有時(shí)會出現(xiàn)假陰性和假陽性的結(jié)果。

免疫化學(xué)發(fā)光法

免疫化學(xué)發(fā)光法是運(yùn)用雙單克隆抗體，其中一個(gè)抗體為降鈣素抗體，另一個(gè)為抗鈣素抗體，分別結(jié)合到PCT分子的降鈣素和抗鈣素部位，可排除交叉反應(yīng)。其中一個(gè)抗體是光標(biāo)記的，另一個(gè)未標(biāo)記的抗體固定在試管的內(nèi)壁，反應(yīng)過程中兩個(gè)抗體與PCT分子結(jié)合而形成三明治復(fù)合體，發(fā)光部位于反應(yīng)管的表面。該法操作簡便，特異性強(qiáng)，敏感性高，測定的低限值為0.1ng/mL，2h可以出結(jié)果。

膠體金免疫層析法

膠體金免疫層析法是一種半定量的檢測方法，包括膠體金標(biāo)記的抗降鈣素的單克隆抗體和用作包被的抗降鈣素多克隆抗體，當(dāng)標(biāo)本(血清或血漿)加人標(biāo)本孔，金標(biāo)單克隆抗體與標(biāo)本中的PCT結(jié)合，形成金標(biāo)記的抗原抗體復(fù)合物。該復(fù)合物在反應(yīng)膜上移動(dòng)，與固定在膜上的抗降鈣素抗體結(jié)合形成更大的復(fù)合物。當(dāng)PCT高于檢測下限時(shí)，夾心復(fù)合物呈紅色帶，顏色深淺與樣品中的PCT濃度成正比。未結(jié)合的示蹤物擴(kuò)增到對照區(qū)，結(jié)合并產(chǎn)生紅色的對照色帶。

半定量PCT檢測有方法簡單、報(bào)告結(jié)果快、不受標(biāo)本數(shù)量和特殊設(shè)備限制等優(yōu)點(diǎn)，然而由于半定量檢測需要肉眼觀察色帶，不同操作者的判斷可能截然不同，尤其是接近陽性下限時(shí)比較難判斷，有時(shí)可能誤導(dǎo)臨床醫(yī)生的治療。比較適合急診科、ICU等重癥監(jiān)護(hù)患者的定性判斷。

乳膠增強(qiáng)免疫比濁法

乳膠增強(qiáng)免疫比濁法中，聚苯乙烯顆粒表面修飾有抗體，當(dāng)檢測樣品中有降鈣素原（PCT）存在時(shí)，基于免疫沉淀反應(yīng)原理形成不溶性免疫復(fù)合物。膠乳增強(qiáng)免疫比濁成本低，性能良好，靈敏度高，操作簡便，更適合臨床推廣應(yīng)用。

放射免疫學(xué)分析法

利用人工合成降鈣素原（PCT）多抗特異性地識別并連接合成氨基酸PCT。此方法檢測的血清PCT濃度可精確到4pg/ml，既能檢測游離PCT，又能檢測結(jié)合性的PCT。該方法與酶免法、免疫化學(xué)發(fā)光法相比，雖提高了檢測的靈敏度，但檢測過程耗時(shí)長，需9-12h，并帶有放射性元素的污染，故臨床應(yīng)用受到限制。

酶聯(lián)免疫及其他檢測方法

酶聯(lián)免疫法應(yīng)用雙抗體夾心法測定人降鈣素原(PCT)水平。用純化的人降鈣素(PCT)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入降鈣素(PCT)，再與HRP標(biāo)記的降鈣素(PCT)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的降鈣素(PCT)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算人降鈣素(PCT)濃度。

其它檢測方法

另外還有凝膠層析法以及高效液相色譜分析法，這兩種方法檢測結(jié)果精確，但比較耗時(shí)，費(fèi)用昂貴，因此限制了它們在臨床的試用。

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